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    发布时间:2022-05-28   点击次数:492次
      昆虫elisa检测试剂盒样品收集、处理及保存方法:
     
      1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
     
      2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
     
      3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
     
      4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
     
      5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
     
      用昆虫elisa检测试剂盒进行实验操作时需注意以下事项:
     
      1.标准品的稀释与加样
     
      2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
     
      3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
     
      4.配液:将30(48t的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48t的20倍)倍稀释后备用。
     
      5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
     
      6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
     
      7.温育:操作同3。
     
      8.洗涤:操作同5。
     
      9.显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
     
      10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
     
      11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
     
      昆虫elisa检测试剂盒操作步骤:
     
      1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
     
      2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
     
      3、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
     
      4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
     
      5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
     
      6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
     
      7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
     
      结果判断
     
      绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
     
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